Análise comparativa de protocolos para extração de DNA genômico em Prosopis juliflora (Sw.) DC

Luiz Henrique Tolentino Santos; Cibelle Santos Dias; Jardyelle Carvalho Lima; Messulan Rodrigues Meira; Carlos Bernard Moreno Cerqueira-Silva

doi:10.5007/2175-7925.2021.e76552

Autores

Luiz Henrique Tolentino Santos Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia
Cibelle Santos Dias UESB
Jardyelle Carvalho Lima UESB
Messulan Rodrigues Meira UESB
Carlos Bernard Moreno Cerqueira-Silva Grupo de Pesquisa 'BioGen' UESB/CNPQ Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia https://orcid.org/0000-0002-1883-4543

DOI:

https://doi.org/10.5007/2175-7925.2021.e76552

Resumo

Objetivou-se comparar a eficiência entre sete protocolos adaptados para a extração de DNA genômico da espécie Prosopis juliflora (Sw). DC. Os protocolos utilizados tiveram como base em seus tampões: SDS 10%; CTAB 5%; Sorbitol, CTAB 3% e Sorbitol; SDS 0,7% e NaCl; CTAB 2%; CTAB 2% e NaCl 1,4M. Em todos os testes, eliminou-se o uso de ?-mercaptoetanol, nitrogênio líquido, proteinase K e RNAses. As amostras consistiram de primórdios folhiares de cada espécime em triplicata. A quantidade e a qualidade do DNA extraído foram avaliadas através de eletroforese em gel de agarose a 1% e da leitura das absorbâncias em espectrofotômetro. Para as reações de amplificação, utilizou o iniciador ISSR. Entre os tampões de extração testados, os de SDS 10%, de CTAB 5% e de CTAB 3% e Sorbitol foram os mais eficientes para P. juliflora. Desses três protocolos, o CTAB 3% e Sorbitol apresentou melhor nível de pureza apesar da menor quantidade de DNA (123 ng/µL) se comparado aos tampõs de SDS 10% e de CTAB 5% (312 e 321 ng/µL, respectivamente, e com alto teor de contaminantes). Conclui-se que é possível o uso de protocolos de extração sem aditivos nocivos à saúde e com menor custo no processo de extração.

Biografia do Autor

Luiz Henrique Tolentino Santos, Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia

Zootecnista, doutorando em Zootecnica pela UESB,Campos Itapetinga

Cibelle Santos Dias, UESB

Bióloga e Mestre em Ciências Ambientais pela UESB, Campus Itapetinga, BA

Jardyelle Carvalho Lima, UESB

Graduanda em Ciências Biológicas e bolsista de Iniciação científica no Laboratório de Biologia Molecular Aplicada da UESB, Campus Itapetinga.

Messulan Rodrigues Meira, UESB

Bióloga, mestra em Ciências Agrárias pela UFMG, doutora em Plantas Medicinais pela UFLA e pós doutoranda pesquisadora em Ciências Ambientais, Laboratório de Genética Molecular Aplicada da UESB, campus Itapetinga.

Carlos Bernard Moreno Cerqueira-Silva, Grupo de Pesquisa 'BioGen' UESB/CNPQ Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia

Mestre e Doutor em Genética e Biologia Molecular pela Universidade Estadual de Santa Cruz - UESC e Universidade Estadual de Campinas - UNICAMP, respectivamente. Atualmente é Professor Adjunto (com D.E.) da UESB, atuando como Diretor do Departamento de Ciências Exatas e Naturais (DCEN/UESB) e Professor Permanente dos Programas de Pós-Graduação em Ciências Ambientais (PPGCA/ UESB, Mestrado), Zootecnia (PPZ/ UESB, Mestrado/Doutorado) e Bioquímica e Biologia Molecular (PMBqBM/ UESB, Mestrado/Doutorado). Atua na área de Genética vegetal e Biologia Molecular, com ênfase em Diversidade Genética, Genética de Populações e Pré-Melhoramento de plantas, sendo revisor de 8 periódicos nacionais e internacionais. Participa atualmente de 6 projetos de pesquisa (já tendo colaborado em outros 17 projetos).

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